SDS-PAGE快速電泳緩沖液(20×,變性電泳,溶液型)
● 產(chǎn)品組成:
貨號
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名稱
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規(guī)格
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TG200
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SDS-PAGE快速電泳緩沖液(20×,變性電泳,溶液型)
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500
ml
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說明書
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一份
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● 產(chǎn)品簡介:
本產(chǎn)品為濃縮型SDS-PAGE快速電泳緩沖液,由Tris-Glycine電泳緩沖液優(yōu)化而來,適用于Tris-Glycine體系(Laemmli體系)蛋白凝膠電泳。與傳統(tǒng)的Tris-Glycine電泳緩沖液相比,使用本產(chǎn)品電泳時無需根據(jù)分離膠和濃縮膠調(diào)整不同電壓,可全程200-250 V恒壓電泳,約20-35 min可完成電泳(低于10%膠濃度),大大節(jié)約時間,并且對小分子蛋白分離效果更好,可使預(yù)染蛋白Marker中10
kD與15 kD條帶分離并清晰可見(凝膠濃度8%以上),達(dá)到快速高效分離蛋白的作用。
本產(chǎn)品為20×濃縮溶液,使用前需要用超純水稀釋20倍后使用,無需調(diào)節(jié)pH值,pH 8.0-8.5。
● 貯存和效期:
常溫貯存,常溫運輸,有效期1年。
● 用前必讀:
1. 和傳統(tǒng)的SDS-PAGE電泳液(Laemmli系統(tǒng),1×Tris-Glycine-SDS電泳緩沖液,25 mM Tris,192 mM Glycine,0.1%
SDS,pH8.3)相比,本快速電泳液可以大幅加快電泳速度,縮短電泳時間。推薦200-250 V恒壓電泳,低于10%膠濃度凝膠通常20-35分鐘就能完成電泳。
2.
使用快速電泳緩沖液單板膠電泳時,穩(wěn)壓200
V,起始電流在45-60 mA,如果同時電泳2板膠或者4板膠,電流會升高,請根據(jù)需求采取降溫措施。
3. 對于低濃度例如6%、8%或10%的固定濃度膠,本快速電泳液比傳統(tǒng)電泳液具有更好的分離效果,可以達(dá)到類似梯度膠的分離效果,更適合小分子量蛋白電泳,蛋白Marker
10kD條帶清晰分離。產(chǎn)生相同分離效果時,使用本快速電泳液可使用濃度更低的分離膠,例如使用傳統(tǒng)電泳液對10%、分離膠進(jìn)行電泳時,使用本快速電泳液時對應(yīng)的分離膠只需要8%即可,電泳效果基本一致,并且由于膠濃度較低,可以增強(qiáng)轉(zhuǎn)膜效率,提高WB檢測靈敏度。
4. 本快速電泳液含有SDS,適用于變性膠蛋白電泳,不適用于非變性電泳(Native-PAGE)。
5.
該快速電泳緩沖液建議用于經(jīng)典Laemmli系統(tǒng)配制的凝膠,經(jīng)測試可以達(dá)到最優(yōu)的分離效果。對于其他電泳系統(tǒng)如Bis-Tris系統(tǒng),HEPES系統(tǒng),Tris-醋酸系統(tǒng),Tricine系統(tǒng)等,需要經(jīng)過驗證測試后使用。
6. 本快速電泳液可以適當(dāng)回收,回收后的電泳液可以作為外槽電泳液再使用1-2次。如果希望獲得最佳的電泳效果,請勿使用回收的電泳液。內(nèi)槽緩沖液每次都需要使用新鮮配制的電泳緩沖液。
● 使用說明:
1. 即用型1×SDS-PAGE快速電泳緩沖液配制:
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即用型1×SDS-PAGE快速電泳緩沖液
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1升配制量
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5升配制量
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20×電泳緩沖液
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50 ml
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250 ml
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超純水
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定容至1升
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定容至5升
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即用型1×SDS-PAGE快速電泳液,建議4℃貯存,可保存1-2周。如果出現(xiàn)變色或沉淀請重新配制新鮮的電泳液。
2. 電泳條件:
全程恒壓電泳,電壓建議為200-250
V。一般情況下,恒壓250 V電泳時,對于濃度為10%的分離膠僅需~22分鐘即可完成電泳。如果需獲得更加平整和銳利的條帶,可以把電壓調(diào)整為150 V,此時電泳時間需要適當(dāng)延長。
電泳電壓與電泳時間(min)對照表
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Laemmli凝膠濃度
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6%
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8%膠
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10%膠
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12%
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15%
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200 V
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~30
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~30
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~33
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~40
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~48
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250 V
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~18
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~18
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~22
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~30
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~35
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● 實驗示例:

SDS-PAGE快速電泳液(TG190)用于各種濃度分離膠的電泳效果圖
上圖為各種濃度分離膠使用快速電泳液的效果圖,
下圖為相同凝膠使用傳統(tǒng)的Tris-甘氨酸電泳液(TG120)的效果圖。
6%~15%的凝膠使用SDS-PAGE凝膠配制試劑盒配制(RTD6116)
樣品:1,2 使用5×雙色蛋白上樣緩沖液 (變性,還原)(PL090)配制;
3 三色預(yù)染寬分子量蛋白Marker II(10-250 kD)(RTD6149),上樣5 μl;
4 雙色預(yù)染寬分子量蛋白Marker(10-170KD)(RTD6105),上樣5 μl;
電泳條件:恒壓200 V
不同蛋白大小選擇不同的分離膠濃度,參考下表:
Laemmli系統(tǒng)
SDS-PAGE分離膠濃度
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最佳分離范圍(kD)
1×SDS-PAGE快速電泳緩沖液
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最佳分離范圍(kD)
1×Tris-Glycine-SDS電泳緩沖液
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6%
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15-300
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50-350
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8%
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10-250
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35-300
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10%
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5-150
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20-150
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12%
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3-100
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15-100
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15%
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低于60
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10-80
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